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詳細信息

【病毒平臺】穩轉株篩選(病毒)

 實驗原理

在基因功能的研究中,基因是否有效轉染靶細胞,是功能研究的前提條件之一。瞬時感染用時少,但得到蛋白量相對少,不能滿足蛋白的大量生產,而且外源基因不能在宿主細胞中長期穩定表達。而穩定表達細胞株則彌補了瞬時感染一些功能實驗中由于外源基因表達時間短的缺陷,便于長期觀察基因對于細胞功能的影響以及蛋白間相互作用。
1. 穩轉細胞系
穩定感染就是慢病毒攜帶的外源DNA整合到宿主細胞染色體上,使宿主細胞可長期表達目的基因及蛋白。需要在瞬時感染基礎上對靶細胞進行篩選,根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物進行細胞傳代,從而得到可穩定表達目的基因的細胞系。最常用的真核表達基因載體的標志物有潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)和嘌呤霉素(puromycin)。
2. 穩定細胞系篩選方法
(1)轉染質粒后,單克隆方法篩選穩定細胞系;
(2)慢病毒感染篩選穩定細胞系。慢病毒感染方法較質粒轉染篩選單克隆方法更方便和高效,是目前主流的穩定細胞系篩選方法。
實驗流程

 

穩轉株篩選.png

 

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